Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成果缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来家兔自身免疫到显现出来1改型乳癌针灸症状的的转改型率在老年人时期就有很好的刻画，多个家兔自身免疫无症状的老年人之后有70%在血浆转换后10年内患上乳癌，而随访15年的老年人这一数目增高到84%。相对来说来说，%针灸1改型乳癌一半以上的改型1改型乳癌的肺癌程序还没有人得到充分的分析。

越来越多的人开始运用于分期该系统来定义1改型乳癌的的转改型：生物体在显现出来多种家兔自身免疫时带入第1下一阶段，显现出来血糖异常时带入第2下一阶段，显现出来症状时带入第3下一阶段。一些多发家兔自身免疫无症状的生物体，在1期和2期，的转改型较更慢，并转改型为肺癌的1改型乳癌。我们之后刻画了一第一组在首次验证到多种家兔自身免疫样本后至多于10年无乳癌的极更慢的转改型者，这第一组病征人数多于，但特性非常明确。随后，我们发现家兔自身免疫特异性CD8+T蛋白质化学反应当在的转改型较更慢的病征之后基本不发挥作用，但在近期肺癌和与此具体的乳癌病征之后很较易验证到。这或许暗示，与的转改型病征比起，这些病征自身免疫化学反应当的抑制增强。

早期分析暗示，尽管抑制性T蛋白质(Treg)数量正常，但乳癌病征发挥作用一些特性缺陷，其之后仅限于对IL-2的化学反应当能力降低。此外，乳癌病征之后的效应当CD4+T蛋白质或许对抑制更具抵抗性，平庸为效应当T蛋白质的减缓减弱，自然环境产生的Treg和人体内产生的可借Treg，以及免疫经历的CD4+T蛋白质之后IL-2化学反应当减弱。本分析的目的是刻画了CD4+抑制性T蛋白质(Treg)在大群极较更慢的转改型者之后的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群必要性将的纵向分析，在21岁以下确诊的病征亲族之后检查1改型乳癌的危险因素。我们之后刻画了长时间较更慢的转改型者的特性，他们保持多重家兔自身免疫无症状超过10年，但没有人显现出来乳癌的针灸症状，更慢性或非神经性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并想要提供大量血液样本的较更慢的转改型者划定T和B蛋白质特性分析。在目前的分析之后，8名更慢的转改型者(SP第一组)，之后位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的家兔自身免疫无症状。所有的行动者都所处1改型乳癌的转改型的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫对某些免疫的无症状化学反应当，然而，一名病征已经所处2期至多于6年，但没有人显现出来针灸症状，一名病征被诊断为乳癌，该受试者72岁，在挖掘试验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在研究小组之后对该遗传物质同步进行了单独评核。分离外周血单个核蛋白质(PBMCs)，运用于多给定流式蛋白质术和T蛋白质减缓试验评核遗传物质之后Treg的频谱、表改型和特性。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复出)同步进行无督导聚类分析，评核Treg表改型。

结果：与健康遗传物质比起，来自更慢的转改型体的遗忘CD4+T蛋白质的督导聚类看出，激活的遗忘CD4+ Treg频谱增高，与糖皮质激素可借的TNFR具体蛋白(GITR)表述增高有关。一名HbA1c增高的病征与的转改型较更慢者和归一化的印证第一组比起，Treg谱有所相异。特性分析暗示，与健康遗传物质比起，来自较更慢的转改型体的Treg介导的CD4+效应当T蛋白质减缓明显受损。平庸为对效应当CD4+T蛋白质CD25和CD134表述的减缓增高。

上图1 透彻的表改型分析看出，CD4+Treg亚改型在更慢的转改型函数调用之后增高。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上面物表述鉴定出10个元簇:遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个相异Treg上面生成的10个元簇的MST。每个节点值得一提的是一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点第一组周围上色。每个节点之后的饼上图说明单个上面的表述级别。(b)每个元聚类的热上图，以看出整体上面表述。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的孔洞。(e-l)相对来说金属量为每个metacluster箱内线上图(金属量> 0.05%)已确定为HD和SP第一组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T蛋白质(l)。粉红色格子值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 运用于CITRUS的预测模改型证明，Treg频谱的增高是的转改型较更慢的标志。这两项去极化(a - f)和柑橘分析(g-k)比起较SP行动者和归一化的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的关联。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的值得一提的是性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述同步进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第一组以及遗传物质SP 606(粉红色)之后CD25+ cd127的频谱概述上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化子集的箱内线上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力渐变，箭头突出的簇被识别为SP和HD函数调用彼此之间的相异。(j)箱内线上图看出了在SP(布氏)和HD(灰点)第一组之后，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对来说金属量(数目)。(k)直方上图看出每个簇的表改型(粉红色)和Treg上面相对来说表述与时代背景表述(粉红色);上列，磁盘Treg_3;示例一行，磁盘Treg_4。时代背景与所有其他簇之后上面的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

上图3 与健康献血者比起，的转改型较更慢者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T蛋白质元簇(遗忘T蛋白质_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T蛋白质;HLA-DR + GITR +遗忘T蛋白质;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热上图(sp606不仅限于在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇之后所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表述串联，看出直方上图(c)和概述上图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有遗传物质仅限于，p< 0.05(粉红色)遗传物质SP 606和归一化的HD不仅限于在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR表述，从这两项去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，看出直方上图(e)和概述上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

上图4 来自较更慢的转改型的CD4+ treg蛋白质控制效应当CD4+T蛋白质的能力降低。SP第一组用粉红色的线和格子说明，HD第一组用黑色的线和格子说明，粉红色的线/格子说明遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培植3同月同步进行流式蛋白质术验证。(a-d)与CD4+转发者相对来说应当的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓总和。运用于无症状印证(激活的响应当蛋白质仅有treg)测算减缓总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

上图5 效应当CD4+T蛋白质对较更慢的转改型的T蛋白质活化的减缓更敏感。SP第一组用粉红色的线和格子说明，HD第一组用黑色的线和格子说明，粉红色的线/格子说明遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上面，treg按掩蔽的数目滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培植3同月同步进行流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分比(b)。(c,d) CD25减缓百分比(c)和CD134减缓百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植之后的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起较测试

结论：我们得出的结论是，来自较更慢的转改型子的活化遗忘CD4+Treg在GITR表述之后得到了扩展和非常丰富，强调了必要性分析Treg在1改型乳癌风险生物体之后的异质性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28