Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展很慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失去甲自身突变到消失1改进型哮喘诊疗征状的的发展率在幼儿时期就有不错的描绘出，多个去甲自身突变阴性的幼儿里面有70%在血清转换后10年内患上哮喘，而随访15年的幼儿这一%增大到84%。相比较之下，分之二诊疗1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的发病机制还从未得不到充分的数据分析。

越来越多的人开始用到分期管理系统来判别1改进型哮喘的的发展：母体在消失多种去甲自身突变时进到第1下一阶段，消失血糖极其时进到第2下一阶段，消失征状时进到第3下一阶段。一些多发去甲自身突变阴性的母体，在1期和2期，的发展较想像里面快，并发展为发病的1改进型哮喘。我们之前描绘出了一分组在首次检测到多种去甲自身突变结果显示后将近10年无哮喘的想像里面想像里面快的发展者，这分组征状人口数少，但相同之处非常明确。随后，我们断定去甲自身抗原基因表达CD8+T蛋白质底物在的发展缓想像里面快的征状里面基本不存在，但在近期发病和长期存在的哮喘征状里面很不易检测到。这可能说明了，与的发展征状相比较，这些征状自身免疫底物的闭环提升。

一时期数据分析说明了，尽管闭环性T蛋白质(Treg)数量长时间，但哮喘征状存在一些管理系统缺点，其里面包括对IL-2的底物能够下降。此外，哮喘征状里面的振荡CD4+T蛋白质可能对闭环极具抵抗性，表现为振荡T蛋白质的减缓减弱，自然地导致的Treg和游离导致的抑制Treg，以及抗原随之而来的CD4+T蛋白质里面IL-2底物减弱。本数据分析的目的是描绘出了CD4+闭环性T蛋白质(Treg)在群集想像里面缓想像里面快的发展者里面的相同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以人群辅以的侧向数据分析，在21岁所列确诊的征状亲属里面健康检查1改进型哮喘的危险因素。我们之前描绘出了长期缓想像里面快的发展者的相同之处，他们保证多重去甲自身突变阴性大约10年，但从未消失哮喘的诊疗征状，想像里面快性或非来进行性自身免疫。随后，10名继续保证无哮喘并愿意提供大量肠道结果显示的缓想像里面快的发展者纳入T和B蛋白质管理系统分析。在现有的数据分析里面，8名想像里面快的发展者(SP分组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身突变阴性。所有的旁观者都始终保持1改进型哮喘的发展的1期，尽管一些人随后丧失了去甲自身突变对某些抗原的阴性底物，然而，一名征状之前始终保持2期将近6年，但从未消失诊疗征状，一名征状被临床为哮喘，该受试者72岁，在收集实验结果显示时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该NAD来进行了单独分析。受控外周血单个氢蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质法术和T蛋白质减缓试验分析NAD里面Treg的频谱、环境因素和管理系统。用到FlowSOM和CITRUS(聚类深入数据分析、总括和回归)来进行无都由聚类分析，分析Treg环境因素。

结果：与健康NAD相比较，来自想像里面快的发展体的心灵CD4+T蛋白质的都由聚类推测，作用于的心灵CD4+ Treg频谱增大，与利尿剂抑制的TNFR之外蛋白(GITR)表示增大有关。一名HbA1c升温的征状与的发展缓想像里面快者和反之亦然的对照分组相比较，Treg谱有所相同。管理系统分析说明了，与健康NAD相比较，来自缓想像里面快的发展体的Treg介导的CD4+振荡T蛋白质减缓明显受损。表现为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134表示的减缓增大。

平面图1 了解的环境因素分析推测，CD4+Treg亚改进型在想像里面快的发展函数调用里面增大。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标识物表示深入数据分析出10个元簇:心灵T蛋白质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T蛋白质;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用到9个相同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个路由表都是一个集群(100个集群)，非常大的元集群(10个元集群)在路由表分组周围手绘。每个路由表里面的饼平面图说明单个标识的表示级别。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整体标识表示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)生成平面图，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较总质量为每个metacluster箱姪该线平面图(总质量> 0.05%)确定为HD和SP分组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T蛋白质(l)。白色圆圈都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用到CITRUS的估测得出结论，Treg频谱的增大是的发展缓想像里面快的标识。PG门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP旁观者和反之亦然的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的关联性。(a)环境因素CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表示来进行受控，模拟FlowSOM群体。(b) HD(外缘)和SP(斑点)分组以及NADSP 606(白色)里面CD25+ cd127的频谱汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控空集的箱姪该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示低压图例，箭头醒目的簇被辨别为SP和HD函数调用之间的相同。(j)箱姪该线平面图推测了在SP(斑点)和HD(灰点)分组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相比较总质量(%)。(k)直方平面图推测每个簇的环境因素(白色)和Treg标识相比较表示与氛围表示(紫色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇里面标识的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与健康献血者相比较，的发展缓想像里面快者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T蛋白质元簇(心灵T蛋白质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T蛋白质;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个表示标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表示热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(棕色)、所有SP(紫色)和SP 606(白色)的FlowSOM GITR表示联接，推测直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(白色)所有NAD包括，p< 0.05(紫色)NADSP 606和反之亦然的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表示，从PG门控，从所有HD(棕色)、所有SP(紫色)和SP 606(白色)联接，推测直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自缓想像里面快的发展的CD4+ treg蛋白质控制振荡CD4+T蛋白质的能够下降。SP分组用紫色的该线和圆圈说明，HD分组用银色的该线和圆圈说明，白色的该线/圆圈说明NADsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按捕捉到的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生蛋白质，人才3同月来进行流式蛋白质法术检测。(a-d)与CD4+这样的话者相比较应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓比率。用到阴性对照(作用于的组织起来蛋白质不含treg)计算减缓比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 振荡CD4+T蛋白质对缓想像里面快的发展的T蛋白质再生的减缓非常敏感。SP分组用紫色的该线和圆圈说明，HD分组用银色的该线和圆圈说明，白色的该线/圆圈说明NADsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质来进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按捕捉到的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生蛋白质，人才3同月来进行流式蛋白质法术(CD25反染)和蛋白质因姪分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓三份(b)。(c,d) CD25减缓三份(c)和CD134减缓三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里面的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们得出的论证是，来自缓想像里面快的发展姪的再生心灵CD4+Treg在GITR表示里面得不到了扩展和多样化，强调了大幅度数据分析Treg在1改进型哮喘可能性母体里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28