Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐构建

从第一次显现出肝细胞内自身病原体到显现出1改进型白血病流行病学呕吐的十分困难率在儿童时期就有很好的阐述，多个肝细胞内自身病原体HIV的儿童中都有70%在小鼠转换后10天内中风白血病，而随访15年的儿童这一数目上升到84%。相来得之下，占流行病学1改进型白血病一半以上的改进型1改进型白血病的肺癌必要还不会给予充分的深入研究。

越来越多的人开始适用分期的系统来定义1改进型白血病的十分困难：个体在显现出多种肝细胞内自身病原体时进入第1过渡期，显现出血糖反常时进入第2过渡期，显现出呕吐时进入第3过渡期。一些多发肝细胞内自身病原体HIV的个体，在1期和2期，十分困难较来得慢，并发展为肺癌的1改进型白血病。我们此前阐述了一分组在首次扫描到多种肝细胞内自身病原体样品后至更加少10年无白血病的极来得慢十分困难者，这分组症状总数更加少，但特征非常一致。随后，我们发现肝细胞内自身抗体特异性CD8+T细胞内质子化在十分困难较来得慢的症状中都整体不实际上，但在近期肺癌和长期实际上的白血病症状中都很较难扫描到。这也许证明，与十分困难症状相来得，这些症状免疫性质子化的通气提升。

早期深入研究证明，尽管通气性T细胞内(Treg)数目出现异常，但白血病症状实际上一些必要缺陷，其中都包含对IL-2的质子化灵活性减低。此外，白血病症状中都的震荡CD4+T细胞内也许对通气极具抵抗性，体现为震荡T细胞内的依赖性消退，自然产生的Treg和游离产生的抑制Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞内中都IL-2质子化消退。本深入研究的目地是阐述了CD4+通气性T细胞内(Treg)在领头极较来得慢十分困难者中都的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

法则：BOX深入研究是一项以人群辅以的纵向深入研究，在21岁表列出住院的症状家庭成员中都质子化器对1改进型白血病的险恶因素。我们此前阐述了长期较来得慢十分困难者的特征，他们始终保持多重肝细胞内自身病原体HIV超过10年，但不会显现出白血病的流行病学呕吐，来得慢性或非透过性免疫性。随后，10名继续始终保持无白血病并愿意提供大量血液样品的较来得慢十分困难者纳入T和B细胞内必要的系统性。在目前的深入研究中都，8名来得慢十分困难者(SP分组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞内自身病原体HIV。所有的参与者都正处于1改进型白血病十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞内自身病原体对某些抗体的HIV质子化，然而，一名症状早已正处于2期至更加少6年，但不会显现出流行病学呕吐，一名症状被确诊为白血病，该人脑72岁，在挖掘出科学实验样品时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据处理中都对该小分子透过了单独评估。裂解外周血单个质子化器细胞内(PBMCs)，选用多实例流式细胞内奥义和T细胞内依赖性试制评估小分子中都Treg的频带、表改进型和必要。适用FlowSOM和CITRUS(聚类断定、就其联和重回)透过无行政官员聚类的系统性，评估Treg表改进型。

结果：与肥胖小分子相来得，来自来得慢十分困难体的思绪CD4+T细胞内的行政官员聚类推测，激活的思绪CD4+ Treg频带上升，与糖皮质激素抑制的TNFR就其细胞内(GITR)表示上升有关。一名HbA1c升温的症状与十分困难较来得慢者和转换的比对分组相来得，Treg谱有所相异。必要的系统性证明，与肥胖小分子相来得，来自较来得慢十分困难体的Treg抑制的CD4+震荡T细胞内依赖性微小毁损。体现为对震荡CD4+T细胞内CD25和CD134表示的依赖性上升。

上图1 深入的表改进型的系统性推测，CD4+Treg亚改进型在来得慢十分困难描述符中都上升。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物表示断定出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)适用9个相异Treg标示填充的10个元簇的MST。每个节点代表一个战斗群(100个战斗群)，更加大的元战斗群(10个元战斗群)在节点分组周围手工。每个节点中都的饼上图指出单个标示的表示级别。(b)每个元聚类的热上图，以推测整体标示表示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相较稀土元素为每个metacluster装线或上图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。浅金色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频带的上升是十分困难较来得慢的图标。分级门控(a - f)和柑橘的系统性(g-k)来得SP参与者和转换的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的民族特色上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表示透过裂解，演示FlowSOM个体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)分组以及小分子SP 606(浅金色)中都CD25+ cd127的频带概要上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的装线或上图;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)玉米簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD描述符中间的相异。(j)装线或上图推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)分组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相较稀土元素(数目)。(k)直方上图推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标示相较表示与故事情节表示(金色);上列，线或程Treg_3;比如说一行，线或程Treg_4。故事情节与所有其他簇中都标示的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对字母秩检验

上图3 与肥胖献血者相来得，十分困难较来得慢者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表示标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表示热上图(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)的FlowSOM GITR表示联结，推测直方上图(c)和概要上图(d)。Wilcoxon配对字母秩和检验，p< 0.07(浅金色)所有小分子包含，p< 0.05(金色)小分子SP 606和转换的HD不包含在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表示，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(金色)和SP 606(浅金色)联结，推测直方上图(e)和概要上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对字母秩检验

上图4 来自较来得慢十分困难的CD4+ treg细胞内控制震荡CD4+T细胞内的灵活性减低。SP分组用金色的线或和橘色指出，HD分组用黑色的线或和橘色指出，浅金色的线或/橘色指出小分子sp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被标示为CFSE, Treg按判读的数目起始。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培训3同一天透过流式细胞内奥义扫描。(a-d)与CD4+接收者者相较应的treg培训(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE依赖性百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性百分比。适用HIV比对(激活的叛离细胞内不含treg)量化依赖性百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差的系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

上图5 震荡CD4+T细胞内对较来得慢十分困难的T细胞内诱导的依赖性更加敏感。SP分组用金色的线或和橘色指出，HD分组用黑色的线或和橘色指出，浅金色的线或/橘色指出小分子sp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内透过分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel标示，treg按判读的数目起始。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培训3同一天透过流式细胞内奥义(CD25反染)和细胞内因次子的系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同完成培训。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE依赖性调升(b)。(c,d) CD25依赖性调升(c)和CD134依赖性调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中都的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差的系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重来得测试

事实：我们得出的事实是，来自较来得慢十分困难次子的诱导思绪CD4+Treg在GITR表示中都给予了扩展和丰沛，重申了促使深入研究Treg在1改进型白血病风险个体中都的异质性的全面性。

原文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28