Diabetologia：激活但功能毁损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到胰脏自身突变到用到1HG肝炎病理症状的的发展率在儿童以前就有不错的阐述，多个胰脏自身突变乙HG肝炎的儿童里面有70%在胰岛素转换后10年内患上肝炎，而随访15年的儿童这一%-缩减到84%。相比之下之下，占病理1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的得病机制还不会得到充分的数据分析。

越来越多的人开始用到仍须系统来界定1HG肝炎的的发展：生殖在用到多种胰脏自身突变时进入第1前期，用到血糖异常时进入第2前期，用到症状时进入第3前期。一些多发胰脏自身突变乙HG肝炎的生殖，在1期和2期，的发展较慢，并发展为得病的1HG肝炎。我们以前阐述了都由在首次扫描到多种胰脏自身突变样本后至多于10年无肝炎的总括慢的发展者，这组成员病变人数多于，但特质非常明确。随后，我们发现胰脏自身抗体选择性CD8+T细胞膜反理应在的发展减慢的病变里面基本不存在，但在近期得病和长一段时间存在的肝炎病变里面很容易扫描到。这或许说明，与的发展病变相比之下，这些病变化脓性反理应的调控增强。

早期数据分析说明，尽管调控性T细胞膜(Treg)数量情况下，但肝炎病变存在一些功能有缺陷，其里面包括对IL-2的反理应能力也增加。此外，肝炎病变里面的effectCD4+T细胞膜或许对调控不具抵抗性，发挥为effectT细胞膜的抑制消退，自然归因于的Treg和粘液归因于的抑制Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞膜里面IL-2反理应消退。本数据分析的目的是阐述了CD4+调控性T细胞膜(Treg)在海岸边总括减慢的发展者里面的特质，他们的平均成年为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以老年人辅以的纵向数据分析，在21岁以下胃癌的病变血亲里面检查1HG肝炎的致命状况。我们以前阐述了长一段时间减慢的发展者的特质，他们依然多重胰脏自身突变乙HG肝炎超过10年，但不会用到肝炎的病理症状，慢性或非顺利进行性化脓性。随后，10名继续依然无肝炎并希望提供大量血清样本的减慢的发展者纳入T和B细胞膜功能深入数据分析。在以外的数据分析里面，8名慢的发展者(SP组成员)，里面位成年43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身突变乙HG肝炎。所有的参加者都西北面1HG肝炎的发展的1期，尽管一些人随后丧失了胰脏自身突变对某些抗体的乙HG肝炎反理应，然而，一名病变仍然西北面2期至多于6年，但不会用到病理症状，一名病变被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据深入数据分析里面对该抑制顺利进行了单独评估。剥离外周血单个核能细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜妖术和T细胞膜抑制试验评估抑制里面Treg的基频、性状和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、密切相关和回归)顺利进行无监督聚类深入数据分析，评估Treg性状。

结果：与肥胖症抑制相比之下，来自慢的发展体的清醒CD4+T细胞膜的监督聚类看出，介导的清醒CD4+ Treg基频缩减，与抗生素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)表示缩减有关。一名HbA1c下降的病变与的发展减慢者和最简单的控制组成员相比之下，Treg谱并不相同。功能深入数据分析说明，与肥胖症抑制相比之下，来自减慢的发展体的Treg酪氨酸的CD4+effectT细胞膜抑制显着受到破坏。发挥为对effectCD4+T细胞膜CD25和CD134表示的抑制缩减。

由此可知1 深入的性状深入数据分析看出，CD4+Treg非典HG在慢的发展队列里面缩减。由FlowSOM生成的Treg室，汇聚在来自所有抑制的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据上标物表示鉴定出10个元簇:清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;两条路线程Treg_1;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;和两条路线程Treg_4。(a)用到9个不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个链表代表一个集群(100个集群)，巨大的元集群(10个元集群)在链表组成员周围打磨。每个链表里面的饼由此可知表示单个上标的表示级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以看出整体上标表示。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)生成由此可知，以及FlowSOM标记的每个元簇的沙质。(e-l)一般来说数量级为每个metacluster箱两条路线由此可知(数量级> 0.05%)明确为HD和SP组成员:两条路线程Treg_2 (e),两条路线程Treg_3 (f),两条路线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞膜(l)。绿色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用到CITRUS的预测模HG证实，Treg基频的缩减是的发展减慢的图案。分级门控(a - f)和橄榄深入数据分析(g-k)更为SP参加者和最简单的HD参加者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR表示顺利进行剥离，各种类型FlowSOM社群。(b) HD(黑点)和SP(杂色)组成员以及抑制SP 606(绿色)里面CD25+ cd127的基频汇总由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控邻域的箱两条路线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(两条路线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(两条路线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(两条路线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+两条路线程T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示强度纹理，箭头突出的簇被标记为SP和HD队列间的不同。(j)箱两条路线由此可知看出了在SP(杂色)和HD(灰点)组成员里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说数量级(%-)。(k)直方由此可知看出每个簇的性状(粉红色)和Treg上标一般来说表示与取材表示(橙色);上列，两条路线程Treg_3;示例一行，两条路线程Treg_4。取材与所有其他簇里面上标的表示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检验

由此可知3 与肥胖症献血者相比之下，的发展减慢者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T细胞膜元簇(清醒T细胞膜_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞膜;HLA-DR + GITR +清醒T细胞膜;两条路线程Treg_2;两条路线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个表示上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表示热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表示串联，看出直方由此可知(c)和汇总由此可知(d)。Wilcoxon配对下标秩和检验，p< 0.07(绿色)所有抑制包括，p< 0.05(橙色)抑制SP 606和最简单的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR表示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(绿色)串联，看出直方由此可知(e)和汇总由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检验

由此可知4 来自减慢的发展的CD4+ treg细胞膜控制effectCD4+T细胞膜的能力也增加。SP组成员用橙色的两条路线和边框表示，HD组成员用白色的两条路线和边框表示，绿色的两条路线/边框表示抑制sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被上标为CFSE, Treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培植3几天后顺利进行流式细胞膜妖术扫描。(a-d)与CD4+转发者一般来说理应的treg培植(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制百分比。用到乙HG肝炎对照(介导的自发细胞膜下同treg)算出抑制百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

由此可知5 effectCD4+T细胞膜对减慢的发展的T细胞膜再造的抑制更敏感。SP组成员用橙色的两条路线和边框表示，HD组成员用白色的两条路线和边框表示，绿色的两条路线/边框表示抑制sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜顺利进行分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel上标，treg按观察的%-滴定。用抗CD3 /28微珠再造细胞膜，培植3几天后顺利进行流式细胞膜妖术(CD25反染)和细胞膜因子深入数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制百份(b)。(c,d) CD25抑制百份(c)和CD134抑制百份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大里面的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢的发展子的再造清醒CD4+Treg在GITR表示里面得到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1HG肝炎风险生殖里面的异质性的实质。

译文中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28