Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展较慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现肝细胞自身淋巴细胞到显现1同型肾病药理学征状的实质性率在学童一时期就有很好的所述，多个肝细胞自身淋巴细胞阴性的学童里有70%在血清匹配后10年内入院肾病，而随访15年的学童这一数目增高到84%。相对来说之下，%药理学1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的得病功能还很难得到充份的研究课题。

越来越多的人开始用到分阶段系统来度量1同型肾病的实质性：族裔在显现多种肝细胞自身淋巴细胞时进入第1过渡期，显现血糖精神状态时进入第2过渡期，显现征状时进入第3过渡期。一些多发肝细胞自身淋巴细胞阴性的族裔，在1期和2期，实质性较慢，并转型为得病的1同型肾病。我们此前所述了一举例来说在首次测定到多种肝细胞自身淋巴细胞抽取后数10年无肾病的极慢实质性者，这举例来说患儿人数少，但特征非常明确。随后，我们发现肝细胞自身淋巴细胞特异性CD8+T抗原里间体将在实质性比较慢的患儿里大体不长期存在，但在近期得病和值得注意的肾病患儿里很容易测定到。这可能表明，与实质性患儿相对来说，这些患儿性疾病里间体将的调节提升。

20世纪研究课题表明，尽管调节性T抗原(Treg)存量显现精神状态，但肾病患儿长期存在一些动态缺陷，其里包括对IL-2的里间体将灵活性降低。此外，肾病患儿里的畸变将CD4+T抗原可能对调节更具抵抗性，观感为畸变将T抗原的诱发逼近，自然地转化成的Treg和体外转化成的抑止Treg，以及淋巴细胞个人经历的CD4+T抗原里IL-2里间体将逼近。本研究课题的目的是所述了CD4+调节性T抗原(Treg)在一小群极比较慢实质性者里的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群为了将的两端研究课题，在21岁以下确诊的患儿亲人里检查1同型肾病的凶险因素。我们此前所述了长期比较慢实质性者的特征，他们保持多重肝细胞自身淋巴细胞阴性超过10年，但很难显现肾病的药理学征状，慢性或非来进行性性疾病。随后，10名继续保持无肾病并不想共享大量血液抽取的比较慢实质性者纳入T和B抗原动态系统性。在现在的研究课题里，8名慢实质性者(SP举例来说)，里位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身淋巴细胞阴性。所有的大多数人都处于1同型肾病实质性的1期，尽管一些人随后挽回了肝细胞自身淋巴细胞对某些淋巴细胞的阴性里间体将，然而，一名患儿仍未处于2期数6年，但很难显现药理学征状，一名患儿被病症为肾病，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性里对该抑止来进行了单独评核。复合外周血单个核抗原(PBMCs)，采用多实例流式抗原术和T抗原诱发试验性评核抑止里Treg的基频、表同型和动态。用到FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和重归)来进行无统筹聚类系统性，评核Treg表同型。

结果：与有益抑止相对来说，来自慢实质性体的心灵CD4+T抗原的统筹聚类说明了，激已逝的心灵CD4+ Treg基频增高，与阿托品抑止的TNFR系统性抗原(GITR)表达出来增高有关。一名HbA1c上升的患儿与实质性比较慢者和匹配的对照举例来说相对来说，Treg五音有所各有不同。动态系统性表明，与有益抑止相对来说，来自比较慢实质性体的Treg介导的CD4+畸变将T抗原诱发明显受损。观感为对畸变将CD4+T抗原CD25和CD134表达出来的诱发增高。

三幅1 险恶的表同型系统性说明了，CD4+Treg亚同型在慢实质性配置文件里增高。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有抑止的已逝CD4+CD45RA -抗原上。根据标识物表达出来核对出10个元簇:心灵T抗原_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T抗原;HLA-DR + GITR +心灵T抗原;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个各有不同Treg标识转化的10个元簇的MST。每个链表代表者一个集群(100个集群)，极大的元集群(10个元集群)在链表举例来说远处打磨。每个链表里的点心三幅坚称单个标识的表达出来级别。(b)每个元聚类的热三幅，以说明了整体标识表达出来。(c, d)为HD举例来说(c)和SP举例来说(d)转化三幅，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起核素为每个metacluster装有等分(核素> 0.05%)明确为HD和SP举例来说:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T抗原(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T抗原(l)。橙色红色代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选记号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模同型证实，Treg基频的增高是实质性比较慢的标志。标准除此以外(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T抗原上的差别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来来进行复合，模拟FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)举例来说以及抑止SP 606(橙色)里CD25+ cd127的基频汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+除此以外同构的装有等分;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来低压著色，标识突出的簇被标记为SP和HD配置文件之间的各有不同。(j)装有等分说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)举例来说里，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起核素(数目)。(k)直方三幅说明了每个簇的表同型(粉红色)和Treg标识比起表达出来与氛围表达出来(浅蓝色);上列，存储器Treg_3;下面悄悄，存储器Treg_4。氛围与所有其他簇里标识的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选记号秩检验

三幅3 与有益献血者相对来说，实质性比较慢者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T抗原元簇(心灵T抗原_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T抗原;HLA-DR + GITR +心灵T抗原;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达出来标识的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表达出来热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，说明了直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon筛选记号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有抑止包括，p< 0.05(浅蓝色)抑止SP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR表达出来，从标准除此以外，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，说明了直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选记号秩检验

三幅4 来自比较慢实质性的CD4+ treg抗原高度集中畸变将CD4+T抗原的灵活性降低。SP举例来说用浅蓝色的终点站和红色坚称，HD举例来说用粉红色的终点站和红色坚称，橙色的终点站/红色坚称抑止sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T抗原来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被标识为CFSE, Treg按仔细观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化抗原，指导3天后来进行流式抗原术测定。(a-d)与CD4+应将答者比起应将的treg指导(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者指导。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发倍数。用到阴性对照(激已逝的自发将抗原包含treg)计算诱发倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变将CD4+T抗原对比较慢实质性的T抗原已逝化的诱发更敏感。SP举例来说用浅蓝色的终点站和红色坚称，HD举例来说用粉红色的终点站和红色坚称，橙色的终点站/红色坚称抑止sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T抗原来进行分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标识，treg按仔细观察的数目滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化抗原，指导3天后来进行流式抗原术(CD25反染)和抗原因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者共同指导。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在浙大里的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论断：我们证明了的论断是，来自比较慢实质性子的已逝化心灵CD4+Treg在GITR表达出来里得到了拓展和多样，忽视了必要性研究课题Treg在1同型肾病风险族裔里的表型的必要性。

标题出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28